血型正反定型操作步骤是什么

　　血型正反定型操作步骤主要包括样本采集、试剂准备、正向定型、反向定型、结果判读五个环节。

1、样本采集：

　　采集受检者静脉血2-3毫升置于抗凝管中，离心分离红细胞与血清。红细胞用生理盐水洗涤3次配制成3%-5%悬液，血清需56℃水浴30分钟灭活补体。操作需在生物安全柜中进行，避免样本污染。

2、试剂准备：

　　准备抗A、抗B单克隆抗体试剂及A型、B型标准红细胞。试剂需平衡至室温，标准红细胞需用生理盐水洗涤后新鲜配制。检查试剂有效期及外观，出现沉淀或浑浊需更换。

3、正向定型：

　　在标记好的玻片或微孔板中分别加入抗A、抗B试剂各1滴，对应加入受检者红细胞悬液1滴，混匀后室温静置10分钟。1000rpm离心1分钟观察凝集反应，出现颗粒状凝集为阳性结果。

4、反向定型：

　　将受检者血清与A型、B型标准红细胞各1滴在玻片上混合，室温静置15分钟后离心。血清中存在对应抗体时会出现红细胞凝集，如A型血清应凝集B型红细胞。

5、结果判读：

　　正向定型显示红细胞抗原，反向定型验证血清抗体，两者结果需相互印证。出现不符时需重复试验，必要时采用试管法或分子生物学方法复核。记录凝集强度（1+至4+），最终出具规范报告。

　　操作全程需佩戴防护装备，严格执行无菌操作规范。实验前后需用75%酒精擦拭台面，废弃标本需高压灭菌处理。定期参加室间质评保证检测准确性，发现ABO亚型或特殊血型应送上级实验室确认。建议医疗机构每季度对操作人员进行标准化培训，确保血型鉴定结果可靠。