临床上为了观察和研究疾病过程中组织和细胞的形态学变化,可将有病变的组织切下,经包括取材、固定、脱水、包埋、切片、染色、封片等主要步骤,制成封固于玻片与盖片之间、厚度一般为3-5微米的切片,即病理切片,供显微镜检查用。
1、取材:人体组织标本来源包括手术切除标本、活检穿刺标本和尸体解剖标本。取材的好坏,直接影响切片的质量。标本一定要新鲜,切取病变组织后需迅速固定冷藏。如不能立即制片,应将标本置于低温或10%四醛溶液中保存;
2、固定:所谓“固定”,就是组织离体后,用各种办法使其细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。组织一旦离体必须及时固定,固定是整个制片过程中无法补救的一步。目的是防止组织细胞自溶与腐败,使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪碳水化合物或酶类转变为不溶性物质,以保持组织细胞的结构与生活时相仿。另外,组织固定后呈一定的硬化状态,而且不易变形,有利于后续的处理;
3、脱水:标本经过固定和冲洗后,还必须将组织块内的水分置换出来,这一过程称为脱水。脱水有利于有机染色溶剂渗入切片标本。脱水是否彻底直接关系到组织是否能充分透明。脱水过度的原因通常是组织在纯乙醇内时间过久,使组织质地发生变化,容易造成组织发脆;
4、包埋:组织块经过固定、脱水、透明、浸蜡等处理后,将其置于融化的固体石蜡中,石蜡凝固后组织即被包埋于石蜡中,此过程称为包埋。经包埋后,使组织达到一定的硬度和韧度,有利于切成理想的薄片;
5、切片:组织经石蜡包埋后制成蜡块,然后用切片机将包埋有组织的蜡块切成薄片,切片厚度一般为3-5微米,切片的要求是完整、薄、均匀;
6、染色:病理切片染色是将完成贴片的切片经过烤片(脱水)和脱蜡处理后,浸入染色液中,经过适当时间的浸泡处理,使组织或细胞及其他成分染上不同深浅的颜色,从而便于在光学显微镜下进行观察,或用数字扫描系统进行扫描制成数字切片;
7、封片:是将染色后的组织切片封固保存于载玻片与盖玻片之间,使之不与空气发生接触,防止其氧化、褪色,利于镜检观察及保存。
当医生需要进一步确定疾病的发展状况时,为得到明确的诊断往往需要对某些部位的组织进行病理切片检查。病理学的诊断是临床诊断疾病的最终诊断,是诊断疾病的证据,一般诊断的误差率很低。
2023-10-25
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